一文輕松學(xué)會如何使用RT-PCR試劑盒
點擊次數(shù)：5992 更新時間：2020-04-03
RT-PCR試劑盒是一種敏感性高，特異性強，重復(fù)性好的實驗診斷方法，由于其試劑穩(wěn)定，易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢。
下面小編要為大家介紹的是RT-PCR試劑盒詳細操作規(guī)程：
1、使用前請先將試劑盒在室溫下平衡半小時。
2、空白孔不加樣，只加顯色劑A，B和終止液用于調(diào)零。
3、標(biāo)準(zhǔn)品孔：每孔加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50μl，零孔加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必須要做，并將其作為標(biāo)曲的后一個點)。
4、樣品孔：加入樣品50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
5、輕輕搖晃，蓋上封板膜，37℃培養(yǎng)箱中孵育30min。
6、將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用。
7、次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
8、加入50μl親和素-HRP到標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中，輕輕搖晃，蓋上封板膜，37℃培養(yǎng)箱中孵育30min。
9、第二次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
10、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
11、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)。
12、測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度，測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
13、計算：ADP試劑盒；RT-PCR試劑盒根據(jù)濃度和OD值算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，建議用計算軟件進行計算，推薦使用ELISAcalc進行計算，擬合模型選用logistic曲線。
